An easy two-step purification method for human leucocyte myeloperoxidase

Basit Öğe Kaydı
dc.authorid0000-0002-2948-2635en_US
dc.authorid0000-0002-0310-9998
dc.contributor.authorSarkarati, Bahram
dc.contributor.authorAkyol, Tülay Karaağaç
dc.contributor.authorKılınç, Kamer
dc.date.accessioned2021-06-23T19:42:29Z
dc.date.available2021-06-23T19:42:29Z
dc.date.issued2015
dc.departmentBAİBÜ, Rektörlük, Bilimsel Endüstriyel ve Teknolojik Uygulama ve Araştırma Merkezien_US
dc.description.abstractObjective: The object of this study is to describe a simple, rapid and cost effective method for purification of human leucocyte myeloperoxidase from a single donor. Myelopeoxidase (MPO) was purified by a two step procedure consisting of concanavalin-A Sepharose 4B affinity chromatography followed by CM-Sephadex cation exchange chromatography. Methods: Leucocytes from a single donor collected by leucopheresis were used in purification studies. MPO was solubilized and extracted from leucocytes by homogenization in phosphate buffer containing 1% HETAB (hexadecyltrimethylammonium bromide). MPO containing soluble material was applied onto concanavalin-A Sepharose 4B affinity gel, and was eluted with methyl-a-D-manno-piranoside. Fractions with MPO activity were pooled, dialyzed and applied onto CM-sephadex cation exchange gel, and was eluted from the column at weak cationic pH with linear NaCl gradient. Results: By the use of two chromatographic procedures, MPO was purified from human leucocytes with 70% yield. Purity of MPO was checked by determining the Reinheit Zahl (RZ) value (A(430)/A(280)). The RZ value of 0.86 indicated that the purified enzyme was highly homogenous as compared to reported experimental values (ranging from 0.82 to 0.88) and pure commercial enzyme with the RZ value of 0.84. Conclusion: In comparison with earlier purification methods, the purification method reported here has higher recovery rate and high purity together. Use of leucocytes with leucopheresis origin help us to omit the leucocyte isolation step and omitting of ammonium sulphate precipitation steps also help us to reduce the cost and is shortened the time of purification.en_US
dc.description.abstractAmaç: Bu çalışmanın amacı, tek vericiden temin edilen lökositlerden miyeloperoksidaz (MPO) enzimini saflaştırmak için basit, hızlı ve ekonomik bir yöntem geliştirmektir. Çalışmada, insan lökosit miyeloperoksidaz enziminin konkanavalin A-Sefaroz 4B afinite kromatografisi ile CM-Sefadeks katyon değiştirici kromatografisinden oluşan iki basamakta saflaştırılması sunulmuştur. Metod: Saflaştırma çalışmasında, lökoferez ile tek kişiden alınmış insan lökositleri kullanıldı. Lökosit miyeloperoksidazı, %1 oranında HETAB (hekzadesiltrimetilamonyum bromide) içeren fosfat tampon içinde çözünürleştirildi ve santrifügasyonla diğer zarsal fraksiyonlardan ayrıştırıldı. Çözünürleştirilen enzim konkanavalin A-Sefaroz afinite jeline uygulandı ve bağlanan enzim bu jelden metil-a-D-manno-piranozid ile indirildi. Kromatografide MPO aktivitesi içeren fraksiyonlar birleştirildi, diyaliz edildikten sonra CM-sefadeks katyon değiştirici kolona uygulandı. Enzim bu kolondan hafif bazik pH’daki fosfat tampon içinde lineer NaCl gradient ile indirildi. Bulgular: Uygulanan iki kromatografik yöntemle MPO enzimi insan lökositlerinden %70 verimle saflaştırıldı. Enzimin saflığı, Reinheit Zahl (RZ) değeri (A430/A280) ölçülerek control edildi. Reinheit Zahl değeri saflaştırılan MPO için 0.86 olarak hesaplandı. Bu RZ değeri, daha önce literatürde saf enzim için bildirilen değerler (0.82–0.88 arasında) ve saf ticari MPO için belirlenmiş değer (0.84) ile karşılaştırıldığında, bu saflaştırma çalışması ile elde edilen enzimin saflığını gösterir. Sonuç: Önceki saflaştırma metotlarıyla karşılaştırıldığında bu metot daha yüksek geri kazanım oranı ve saflık oranını birlikte sunmaktadır. Lökofrez kaynaklı lökosit kullanımı ve amoniyum sulfat basamağının çıkarılması maliyetin azalması ve zamanın kısalmasını sağlamıştır.
dc.identifier.doi10.1515/tjb-2015-0035
dc.identifier.endpage416en_US
dc.identifier.issn0250-4685
dc.identifier.issn1303-829X
dc.identifier.issue5en_US
dc.identifier.scopus2-s2.0-84943571125en_US
dc.identifier.scopusqualityQ4en_US
dc.identifier.startpage410en_US
dc.identifier.urihttps://doi.org/10.1515/tjb-2015-0035
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.12491/8506
dc.identifier.volume40en_US
dc.identifier.wosWOS:000362432300009en_US
dc.identifier.wosqualityQ4en_US
dc.indekslendigikaynakWeb of Scienceen_US
dc.indekslendigikaynakScopusen_US
dc.institutionauthorSarkarati, Bahram
dc.language.isoenen_US
dc.publisherWalter De Gruyter Gmbhen_US
dc.relation.ispartofTurkish Journal Of Biochemistry-Turk Biyokimya Dergisien_US
dc.relation.publicationcategoryMakale - Uluslararası Hakemli Dergi - Kurum Öğretim Elemanıen_US
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/closedAccessen_US
dc.subjectMyeloperoxidaseen_US
dc.subjectHuman Leucocytesen_US
dc.subjectPurificationen_US
dc.titleAn easy two-step purification method for human leucocyte myeloperoxidaseen_US
dc.title.alternativeİnsan lökosit miyeloperoksidazı saflaştırılması için kolay 2 basamaklı yöntemen_US
dc.typeArticleen_US

Dosyalar

Orijinal paket
Listeleniyor 1 - 1 / 1
Küçük Resim Yok
İsim:
bahram-sarkarati.pdf
Boyut:
402.37 KB
Biçim:
Adobe Portable Document Format
Açıklama:
Tam Metin/Full Text
İndir

Koleksiyon

WoS İndeksli Yayınlar Koleksiyonu
Bilimsel Endüstriyel ve Teknolojik Uygulama ve Araştırma Merkezi
Scopus İndeksli Yayınlar Koleksiyonu